เมื่อวันที่ 9 เมษายน ค.ศ. 1483 พระเจ้าเอ็ดเวิร์ดที่ 4 เสด็จสวรรคต ริชาร์ดได้รับแต่งตั้งให้เป็น “เจ้าผู้พิทักษ์” หรือผู้สำเร็จราชการแทนพระนัดดาพระเจ้าเอ็ดเวิร์ดที่ 5และพระอนุชา ริชาร์ดแห่งชรูว์สบรี ดยุคแห่งยอร์คที่ 1

เมื่อวันที่ 22 มิถุนายน ค.ศ. 1483 พระเจ้าเอ็ดเวิร์ดที่ 5 และพระอนุชาก็ถูกประกาศว่าเป็นพระโอรสนอกสมรส (Titulus Regius) ของพระเจ้าเอ็ดเวิร์ดที่ 4 ตามหลักฐานการกล่าวอ้างของบาทหลวงราล์ฟ ชา ผู้ให้การว่าเป็นผู้ทำการสมรสระหว่างพระเจ้าเอ็ดเวิร์ดที่ 4 กับเลดี้เอเลเนอร์ ทาลบอทผู้ที่ยังมีชีวิตอยู่เมื่อพระเจ้าเอ็ดเวิร์ดมาสมรสกับเอลิซาเบธ วูดวิลล์ผู้ต่อมาเป็นพระราชินีเอลิซาเบธ วูดวิลล์ ซึ่งทำให้ทั้งสองพระองค์ไม่มีสิทธิในราชบัลลังก์ตามกฎหมาย ผู้ที่มีสิทธิถูกต้องในราชบัลลังก์จึงเป็นริชาร์ดผู้ขึ้นครองราชย์เป็นสมเด็จพระเจ้าริชาร์ดที่ 3 แอนน์ได้รับการสวมมงกุฏเป็นสมเด็จพระราชินี เอ็ดเวิร์ดแห่งมิดเดิลแฮมพระราชโอรสได้รับแต่งตั้งให้เป็นเจ้าชายแห่งเวลส์ แต่เอ็ดเวิร์ดแห่งมิดเดิลแฮมมาสิ้นพระชนม์อย่างกะทันหันเมื่อวันที่ 9 เมษายน ค.ศ. 1483 ที่เชอริฟฟ์ ฮัตตัน (Sheriff Hutton) ซึ่งทำให้ทั้งริชาร์ดและแอนน์โศรกเศร้าเป็นอันมาก แอนน์หันมาเลี้ยง เอ็ดเวิร์ด เอิร์ลแห่งวอริค (Edward, Earl of Warwick) ผู้เป็นหลานอย่างลูก พระเจ้าริชาร์ดทรงแต่งตั้งเอ็ดเวิร์ดให้เป็นรัชทายาทซึ่งอาจจะตามความประสงค์ของแอนน์

ข่าวลือที่ว่าพระเจ้าริชาร์ดจะทรงหย่ากับแอนน์เพื่อจะไปเสกสมรสกับเอลิซาเบธแห่งยอร์คเกิดขึ้นหลังจากที่เอ็ดเวิร์ดแห่งมิดเดิลแฮมสิ้นพระชนม์ไปแล้วแต่ก็ไม่มีหลักฐานสนับสนุนข่าวลือที่ว่านี้ แอนน์สิ้นพระชนม์เมื่อวันที่ 16 มีนาคม ค.ศ. 1485 เมื่อพระชนมายุได้ 29 พรรษา อาจจะจากวัณโรค พระศพตั้งอยู่ที่ทางขวาของแท่นบูชาเอกใกล้กับประตูชาเปลคอนเฟสเซอร์ (Confessor's Chapel) แอบบีเวสต์มินสเตอร์ ในหลุมศพที่ไม่มีเครื่องหมาย จนกระทั่งสมาคมพระเจ้าริชาร์ดที่ 3 มาติดตั้งให้เมื่อปี ค.ศ. 1960